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赛普科普 | 为何新冠病毒核酸检测可能出现假阳性?
2022-03-10



首先是实验人员严格遵守新冠病毒核酸检测的规章制度,是防止实验室污染的重要前提。

其次是实验室的结构。实验室的每个区域都需要一个相对独立的结构,各区物品不混用,仅通过传输窗传输,并沿单一方向流动。特别是样品处理区域应确保与传输窗口以外的其他区域没有通信。



最后,临床取样过程也非常重要。例如,新冠疫苗导致的假阳性在疫苗中的核酸片段被完全降解之前,如果留在人体表面或衣服上的核酸片段污染了样本,则在高灵敏度PCR扩增后很可能产生假阳性结果。


新冠弱阳性质控品和阳性对照品本身就是阳性物质。如果处理或储存不当,它们很容易被污染并导致假阳性。实验室应注意将弱阳性质控品和检测试剂分开存放

试剂盒打开后,阳性对照品和阴性对照品也应转移到样品处理区,以便正确放置;打开盖子前,应立即取出阳性对照品和弱阳性质控品,以避免打开盖子时溅落或污染手套;采样时,应先添加样品和阴性对照,再覆盖其他行的PCR管盖,然后添加阳性对照。

不得在安全柜内添加阳性对照品和弱阳性质控品;操作时手套的尺寸必须合适。宽松的手套更容易被污染。如果手套可能受到污染,应及时将手套退回并丢弃,并更换新手套。经常更换手套可以有效地减少各种污染。


目前,大多数实验室都有大量的检测工作,在样品添加和提取过程中容易发生交叉污染。特别是,当重点人群(如隔离人员)的样本与普通健康筛查人群的样本一起检测时,更容易产生假阳性。在这方面,我们应该注重人群样本和一般健康筛查人群样本的储存和批量检测



在检测过程中,我们应该按照《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行第二版)》要求中随机放置3个生理盐水,以便在实验过程中监测污染情况。


如果PCR管盖盖不严或加热变形,扩增产物会蒸发到PCR仪器和实验室中,造成大量持续污染。尤其是弱阳性质控品和阳性质控孔泄漏后,更容易污染实验室,产生大量假阳性。在这方面,我们应该选择质量检验合格的匹配PCR管和管盖



取样后,确认所有PCR管均已覆盖且无松动,然后使用机器进行扩增;扩增PCR管应小心取出,迅速放入密封袋中,用于一般医疗废物处理。严禁打开盖子和高压灭菌处理。对于容易出现假阳性的实验室,应进行实验室环境污染评估实验。如果实验室环境受到污染,应暂停日常实验室测试,并对环境进行清洁、消毒和通风。


如果试剂在制备过程中被阳性质控品或阳性样品污染,则整板测试为阳性。通过更换试剂并重新放大,可以确定扩增产物是否受到污染或试剂受到污染。作为预防措施,我们应严格遵守实验室的规章制度,如实验室的单流程操作和实验室工作服和物品的不混合;同时,还应注意阳性质控品和作者前面提到的阳性质控品的储存。


目前,由于每个实验室的检测量很大,在样品混合、采样和提取过程中不可避免地会产生气溶胶。如果处理不当,可能会造成假阳性样品的污染。此外,如果实验室检测试剂使用克隆质粒作为阳性对照,很可能会造成污染,因为单位体积中克隆质粒的含量相当高,活细胞中的生长和繁殖更方便。作为预防措施,应在每批实验结束后进行2小时的紫外线消毒。如果可能的话,可以使用尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG)同时清洁关键区域,以修饰和分解实验室中残留的核酸。

当实验结束后,我们仍然不能放松警惕,除了正确发布报告外,为保障下一次实验的顺利进行,避免假阳性,实验室清洁及2小时的紫外消杀、定期使用核酸清除剂处理工作台面、加样枪、实验室终末消毒等工作也必不可少。


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