① 引物：优化引物设计。

② 退火温度：设置退火温度梯度，找到合适的退火温度。 

③ 引物浓度：适当提高引物浓度。 

④ 延伸时间：适当增加延伸时间至10 - 15 sec/kb。

⑤ 循环数：增加循环数至36 - 40个循环。

⑥ 模板纯度：使用高纯度模板。 

⑦ 模板使用量：使用量参照反应体系推荐量调整并适当增加。

① 引物：优化引物设计。 

② 退火温度：尝试提高退火温度并设置退火温度梯度。 

③ 引物浓度：适当降低引物浓度。 

④ 循环数：减少循环数至25 - 30个循环。 

⑤ 反应程序：使用两步法或Touch down PCR程序。 

⑥ 模板纯度：使用高纯度模板。 

⑦ 模板使用量：使用量参照反应体系推荐量调整并适当减少。