CCK-8は細胞増殖および細胞毒性に広く応用される細胞生物学実験です。CCK-8溶液は直接細胞サンプルに添加でき、各種成分を事前に調製する必要はありません。細胞増殖が多ければ多いほど、また速ければ速いほど、細胞の色は濃くなり、毒性が小さいことを証明します。細胞毒性が大きいほど、色は薄くなります。同じ細胞に対して、色の濃淡（生成されたformazan量）と細胞数は線形関係にあります。

細胞、96ウェル細胞培養プレート、CO2インキュベーター、クリーンベンチ、微量ピペット、マイクロプレートリーダー、CCK-8試薬キットなど。

4. 吸光度を測定します。二波長での測定を推奨し、検出波長430〜490nm、参照波長600〜650nm、または450nm単波長での検出も可能です。

計算式 細胞生存率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%阻害率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As: 実験ウェルの吸光度（細胞、培地、CCK-8溶液および薬物溶液を含む）；Ac: 対照ウェルの吸光度（細胞、培地、CCK-8溶液を含み、薬物を含まない）；Ab: ブランクウェルの吸光度（培地、CCK-8溶液を含み、細胞、薬物を含まない） 

1. 細胞の初期培養体積が200ulの場合、20ulのCCK-8溶液を添加する必要があり、以下同様です。

2. 各薬物濃度のウェルに3つの複製ウェルを設定し、最後に平均値を取って曲線を作成することを推奨します。

3. 実験対照を適切に設計し、他の要因の干渉をできるだけ排除します：1）ブランク対照：等量の細胞培養液、CCK-8溶液および薬物を添加したが細胞を添加していないウェルを使用できます；2）陰性対照：薬物を添加せず薬物溶媒を添加した細胞ウェル。

4. キットの検出は脱水素酵素触媒反応に依存しているため、被験物質に酸化性または還元性がある場合、検出を妨害する可能性があり、除去する必要があります（CCK-8溶液添加前に新鮮な培地に交換し、薬物の影響を取り除く。薬物の影響が比較的小さい場合、培地を交換せず、培地に薬物を添加した後のブランク吸収を直接差し引くことができます）。

5. CCK-8溶液添加後のインキュベート時間に注意してください。インキュベート時間の長さは細胞の種類や細胞密度などの実験状況によって決まります。初回実験時は0.5、1、2、4時間後にそれぞれマイクロプレートリーダーで検出し、吸光度範囲が適切な時間点を選択して以降の実験に使用できます。

6. 細胞をインキュベーター内で培養する際、培養プレートの最外側のウェルは乾燥・揮発しやすく、体積が不正確になることで誤差が増加します。一般的に、最外圈のウェルには培地のみを添加し、測定ウェルとしては使用しません。。

7. 一時的にOD値を測定しない場合、各ウェルに10ulの10% SDS溶液を添加して反応を停止させ、培養プレートを遮光して室温条件下で保存できます。24時間以内に測定すれば、吸光度は大きく変化しませんが、一般的にはすぐに検出することを推奨します。

8. マイクロプレートリーダーで検出する前に、各ウェル内に気泡がないことを確認してください。そうでないと測定を妨害します。

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