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Ciencia popular de Saipu | ¿Por qué la prueba de ácido nucleico del nuevo coronavirus puede dar un falso positivo?
2022-03-10



En primer lugar, el personal experimental cumple estrictamente las normas y reglamentos de la prueba de ácido nucleico del nuevo coronavirus, lo cual es un requisito previo importante para prevenir la contaminación del laboratorio.

En segundo lugar está la estructura del laboratorio.Cada área del laboratorio necesita una estructura relativamente independiente; los artículos de cada área no se mezclan, se transmiten únicamente a través de la ventana de transferencia y fluyen en una sola dirección. En particular, el área de procesamiento de muestras debe garantizar que no haya comunicación con otras áreas fuera de la ventana de transferencia.



Por último, el proceso de muestreo clínico también es muy importante.Por ejemplo, en el caso de los falsos positivos causados por la vacuna contra la COVID-19, antes de que los fragmentos de ácido nucleico de la vacuna se degraden por completo, si los fragmentos de ácido nucleico que quedan en la superficie del cuerpo o en la ropa contaminan la muestra, trasla amplificación por PCR de alta sensibilidades muy probable que se produzca un resultado falso positivo.



Los controles de calidad de positivo débil y los controles positivos de la COVID-19 son en sí mismos sustancias positivas. Si se manipulan o almacenan de forma inadecuada, se contaminan fácilmente y provocan falsos positivos.El laboratoriodebe prestar atención a almacenar por separado los controlesde calidad de positivo débil y los reactivos de detección。

. Una vez abierto el kit, los controles positivos y negativos también deben transferirse al área de procesamiento de muestras para su correcta colocación; antes de abrir la tapa, deben extraerse de inmediato el control positivo y el control de calidad de positivo débil para evitar salpicaduras o contaminación de los guantes al abrir la tapa; al muestrear, primero deben añadirse la muestra y el control negativo,y luego cubrir las tapas de los tubos de PCR de las otras filas, y después añadir el control positivo.

No se deben añadir el control positivo ni el control de calidad de positivo débil dentro de la cabina de seguridad; durante la operación, el tamaño de los guantes debe ser adecuado. Los guantes holgados se contaminan con mayor facilidad. Si es posible que los guantes estén contaminados, deben retirarse y desecharse de inmediato, y cambiarse por guantes nuevos. Cambiar los guantes con frecuencia puede reducir eficazmente diversos tipos de contaminación.


Actualmente, la mayoría de los laboratorios tienen una gran carga de trabajo de detección, y durante el proceso de adición y extracción de muestras se producen fácilmente contaminaciones cruzadas. En particular, cuando las muestras de grupos de atención prioritaria (como las personas en aislamiento) se detectan junto con las muestras de la población general sometida a cribado de salud, es más fácil que se produzcan falsos positivos.En este sentido, debemos prestar atención al almacenamiento y a la detección por lotes de las muestras de la población y de las muestras de la población general sometida a cribado de salud。



. Durante el proceso de detección, debemos colocar aleatoriamente 3 soluciones salinas fisiológicas según lo exigido en el "Manual de trabajo para la prueba de ácido nucleico del nuevo coronavirus en instituciones médicas (segunda versión de prueba)", a fin de monitorear la contaminación durante el experimento.


Si las tapas de los tubos de PCR no se cierran bien o se deforman por el calor, los productos de amplificación se evaporarán en el instrumento de PCR y en el laboratorio, causando una gran contaminación continua. Especialmente después de la fuga de los controles de calidad de positivo débil y de los pocillos de control positivo, es más fácil contaminar el laboratorio y generar una gran cantidad de falsos positivos.En este sentido, debemos seleccionar tubos de PCR y tapas de tubo compatibles que hayan superado la inspección de calidad。



. Después del muestreo, confirmar que todos los tubos de PCR estén cubiertos y no flojos, y luego usar la máquina para la amplificación; los tubos de PCR amplificados deben extraerse con cuidado y colocarse rápidamente en bolsas selladas para el tratamiento general de residuos médicos. Está estrictamente prohibido abrir las tapas y someterlas a esterilización por autoclave.Para los laboratorios propensos a falsos positivos, debe realizarse un experimento de evaluación de la contaminación ambiental del laboratorio. Si el entorno del laboratorio está contaminado, deben suspenderse las pruebas diarias del laboratorio y realizarse la limpieza, desinfección y ventilación del entorno.


Si el reactivo se contamina con controles positivos o muestras positivas durante el proceso de preparación, toda la placa de prueba resulta positiva. Mediante el cambio del reactivo y la nueva amplificación, se puede determinar si el producto de amplificación está contaminado o si el reactivo está contaminado. Como medida preventiva, debemos cumplir estrictamente las normas y reglamentos del laboratorio, como la operación de flujo único en el laboratorio y la no mezcla de batas y artículos del laboratorio; al mismo tiempo, también debemos prestar atención al almacenamiento de los controles positivos y de los controles positivos mencionados anteriormente por el autor.


Actualmente, debido al gran volumen de detección de cada laboratorio, es inevitable que se generen aerosoles durante la mezcla de muestras, el muestreo y la extracción.Si se manipulan de forma inadecuada, pueden causar la contaminación de muestras con falsos positivos. Además, si el reactivo de detección del laboratorio utiliza plásmidos clonados como control positivo, es muy probable que cause contaminación, ya que el contenido de plásmidos clonados por unidad de volumen es bastante alto, y el crecimiento y la reproducción en células vivas es más conveniente. Como medida preventiva, debe realizarse una desinfección con luz ultravioleta durante 2 horas después de finalizar cada lote de experimentos. Si es posible, puede utilizarse la uracil-N-glicosilasa (UNG) para limpiar simultáneamente las áreas clave, con el fin de modificar y descomponer los ácidos nucleicos residuales en el laboratorio.

Cuando el experimento termina, todavía no podemos bajar la guardia. Además de publicar correctamente el informe, para garantizar el buen desarrollo del próximo experimento y evitar falsos positivos, también son indispensables la limpieza del laboratorio y la desinfección con luz ultravioleta durante 2 horas, el tratamiento periódico de la superficie de trabajo y las pipetas con agentes de eliminación de ácidos nucleicos, así como la desinfección terminal del laboratorio.

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